介绍三种测定植物组织蛋白质含量的方法。
 
作者:海文学校  来源:www.weisanli.com
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答:凯氏定氮法,紫外分光光度计法,Folin一酚试剂法。
1.凯氏定氮法:原理为根据氮元素在氨基酸中的平均比例,通过测定样品中氮元素的含量推定蛋白质含量。首先用浓硫酸消化蛋白质,所分解出的氨与硫酸生成硫酸铵,其次用凯氏定氮仪蒸馏并通过酸碱滴定测出氨量并求得含氮量。再乘以6.25即为植物组织蛋白质含量。
2.紫外分光光度计法:原理为蛋白质在280nm波长处,蛋白质溶液的光吸收值与其含量成正比,可于280nm和260nm处分别用紫外分光光度计测其吸光度,并用(1.45A280-0.74A260)×稀释倍数×100/1000求出蛋白质含量。
3.Folin一酚试剂法:原理为蛋白质或多肽分子中含有酪氨酸或色氨酸,能与Folin-酚试剂起氧化还原反应生成蓝色化合物,蓝色的深浅与蛋白质浓度成正比。首先在碱性条件下,令蛋白质与铜作用生成蛋白质一铜络合物;随后将此络合物用Folin试剂还原,产生深蓝色物质,颜色深浅与蛋白质含量成正比。配取一定量标准蛋白溶液,以不含蛋白质的试样为对照,在650nm波长下比色,绘制标准曲线,然后测出样品的吸光度,从表中查出含量并计算。